斑馬魚(yú)敲降CRISPRi法與MO（嗎啡啉）法比較

一、基因敲降的前期準(zhǔn)備工作相同1.1?生物信息學(xué)分析目標(biāo)基因在斑馬魚(yú)早期胚胎發(fā)送過(guò)程中是否有表達(dá)。1.2?收集斑馬魚(yú)早期發(fā)育胚胎（通常為48?hpf?前的胚胎），提取總RNA，然后進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄（RT）。1.3?設(shè)計(jì)檢測(cè)目標(biāo)基因表達(dá)的PCR?引物，以1.2獲得的cDNA?為模板，進(jìn)行PCR?擴(kuò)增，確認(rèn)目標(biāo)基因在早期有表達(dá)。二、MO法與CRISPRi法的敲降原理不同2.1?MO?是在轉(zhuǎn)錄后水平上敲降基

斑馬魚(yú)敲降CRISPRi法與MO（嗎啡啉）法比較

一、基因敲降的前期準(zhǔn)備工作相同1.1?生物信息學(xué)分析目標(biāo)基因在斑馬魚(yú)早期胚胎發(fā)送過(guò)程中是否有表達(dá)。1.2?收集斑馬魚(yú)早期發(fā)育胚胎（通常為48?hpf?前的胚胎），提取總RNA，然后進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄（RT）。1.3?設(shè)計(jì)檢測(cè)目標(biāo)基因表達(dá)的PCR?引物，以1.2獲得的cDNA?為模板，進(jìn)行PCR?擴(kuò)增，確認(rèn)目標(biāo)基因在早期有表達(dá)。二、MO法與CRISPRi法的敲降原理不同2.1?MO?是在轉(zhuǎn)錄后水平上敲降基

斑馬魚(yú)基因功能研究-基因敲降

一般推薦MO+CRISPRi兩種策略去同時(shí)敲降一個(gè)基因，由于MO是在轉(zhuǎn)錄后水平上敲降基因的功能，而CRISPRi是在轉(zhuǎn)錄水平上敲降基因的功能，使用兩種獨(dú)立的、原理完全不同的敲降方法，如果給出的敲降效果（表型）是一樣的，那么這樣建立的敲降方法可以被認(rèn)可是有效且特異的。請(qǐng)大家注意：評(píng)價(jià)基因敲降效果需要從有效和特異兩個(gè)方面來(lái)考慮。有效性問(wèn)題：CRISPRi敲降的有效性可以通過(guò)RT-PCR法檢測(cè)目標(biāo)基因表