無需基因突變，治療先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良1A型

先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良1A型（MDC1A），是肌營(yíng)養(yǎng)不良癥的一種，屬于遺傳性消耗疾病，因編碼層黏連蛋白α2的 LAMA2 基因發(fā)生突變導(dǎo)致，之前的研究表明，增加編碼層黏連蛋白α1（LAMA1）的表達(dá)，可以幫助緩解該疾病小鼠模型的癥狀，但由于LAMA1基因較大，遞送LAMA1基因的常規(guī)基因治療方法難以實(shí)現(xiàn)。

2019年7月24日，加拿大多倫多兒童病醫(yī)院 Ronald D. Cohn 團(tuán)隊(duì)在 Nature 雜志發(fā)表了題為：A mutation-independent approach for muscular dystrophy via upregulation of a modifier gene 的最新論文。

研究人員使用CRISPR-dCas9技術(shù)，通過AAV9型病毒載體遞送，激活LAMA1基因，從而上調(diào)了Lama1蛋白的表達(dá)，MDC1A疾病模型小鼠在接受這種治療后，能夠預(yù)防肌肉消耗和麻痹癥狀，而且該方法能夠幫助已經(jīng)出現(xiàn)肌營(yíng)養(yǎng)不良癥狀的小鼠恢復(fù)部分肌肉功能。

總的來說，這些數(shù)據(jù)證明了CRISPR-dCas9介導(dǎo)的上調(diào) Lama1 蛋白的方法是可行的，而且有明顯的治療益處，這表明無需引入基因突變，即可對(duì)先天性肌營(yíng)養(yǎng)不良1A型（MDC1A）患者進(jìn)行治療。而且該方法對(duì)多種疾病調(diào)節(jié)基因具有廣泛的適用性，并且可以作為許多先天性遺傳疾病和后天性疾病的治療策略。

對(duì)CRISPR/Cas9治療杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良的長(zhǎng)期觀察

2019年2月份，美國杜克大學(xué)的研究人員在國際頂級(jí)醫(yī)學(xué)期刊 Nature Medicine 雜志發(fā)表了題為：Long-term evaluation of AAV-CRISPR genome editing for Duchenne muscular dystrophy 的研究論文。

該研究使用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)，直接刪除導(dǎo)致杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥的基因突變位點(diǎn)附近的堿基，產(chǎn)生縮短版的抗肌萎縮蛋白，成功恢復(fù)部分肌肉能力。實(shí)驗(yàn)還表明，一次注射，效果可持續(xù)一年以上。

杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥（DMD）是一種發(fā)病率相對(duì)較高的單基因疾病，由X染色體上編碼抗肌萎縮蛋白基因（dystrophin）突變所致，是治療性基因組編輯的熱門候選者。最近有幾個(gè)在DMD的臨床前模型中進(jìn)行基因組編輯的研究報(bào)道，然而，這些基因組編輯方法的長(zhǎng)期持久性和安全性尚未得到解決。

由于dystrophin基因巨大，有多達(dá)79個(gè)外顯子，因此直接遞送正確編碼的dystrophin基因的治療方式行不通。該研究另辟蹊徑，使用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)，直接刪除突變位點(diǎn)附近的堿基，產(chǎn)生縮短版的抗肌萎縮蛋白，依然可以恢復(fù)部分肌肉能力。

本項(xiàng)研究顯示，通過靜脈單次注射AAV8裝載的CRISPR后，基因組編輯效果在肌營(yíng)養(yǎng)不良癥的小鼠模型中可持續(xù)長(zhǎng)達(dá)1年的時(shí)間。此外，在此期間抗肌萎縮蛋白表達(dá)的恢復(fù)得以維持。

這項(xiàng)研究還表明AAV-CRISPR在給予成年小鼠治療時(shí)具有免疫原性，然而，通過治療新生小鼠可以避免體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。盡管存在對(duì)Cas9的宿主反應(yīng)和持續(xù)的非預(yù)期的基因組修飾，但AAV-CRISPR具有良好的耐受性，長(zhǎng)達(dá)1年時(shí)間，且沒有毒性跡象。

該研究進(jìn)一步確定了永久性基因校正作為DMD和潛在其他疾病的治療方法的可行性。未來的研究應(yīng)側(cè)重于通過優(yōu)化遞送和基因編輯策略來提高整體編輯效率和增加預(yù)期基因修飾的比例（減少脫靶效應(yīng)）。