
斑馬魚發(fā)育過程簡述
發(fā)布時間:
2023-03-17
斑馬魚由于養(yǎng)殖方便、繁殖周期短、產(chǎn)卵量大、胚胎體外受精、體外發(fā)育、胚體透明。全球范圍內(nèi)有超過1500個斑馬魚實(shí)驗(yàn)室。多種組織器官具有再生能力,精子可冷凍保存,對外界環(huán)境反應(yīng)迅速以及基因組與人類同源性高等特點(diǎn)。因此在近20年來,已成為生命科學(xué)研究的新寵,遺傳學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、腫瘤學(xué)、再生和干細(xì)胞研究、疾病模型和藥物篩選、環(huán)境毒理學(xué)、基礎(chǔ)水產(chǎn)學(xué)等科研領(lǐng)域。
斑馬魚受精卵直徑在0.7mm左右,外部由一層卵殼覆蓋保護(hù)。受精卵從結(jié)構(gòu)上可分為動物極和植物極兩部分。動物極為進(jìn)行細(xì)胞分裂的動物發(fā)育部分;植物極俗稱卵黃。
在胚胎發(fā)育早期為動物極提供所需的物質(zhì)和營養(yǎng),斑馬魚胚胎在受精后的5天時間內(nèi)不需要從外界攝取食物。斑馬魚發(fā)育分為8個階段:合子期,卵裂期,囊胚期,原腸胚期、體節(jié)期、咽胚期,孵化期和早幼期。
合子期(zygote period)及卵裂期(cleavage period)
首先,受精卵在受精后10分鐘左右卵殼膨開,形成空腔。動物極的首次細(xì)胞分裂發(fā)生在受精后45分鐘左右,胚胎進(jìn)入卵裂期;之后以大約以每15分鐘一次細(xì)胞分裂的速度快速發(fā)育;在受精后2小時(2hpf, hours post fertilization)分裂達(dá)到64個細(xì)胞,進(jìn)入囊胚期。
囊胚期(blastula period)
2.75hpf,胚胎達(dá)到512細(xì)胞期,胚胎自身的合子基因開始表達(dá)。3hpf胚胎達(dá)到1000 細(xì)胞期,在動物極和卵黃之間可見清晰的單層YSL細(xì)胞核層(yolk syncytial layer nuclei)。經(jīng)過再一次細(xì)胞周期后,胚胎進(jìn)入高囊胚階段(high stage)。這一階段的胚胎,細(xì)胞堆疊很高,卵黃和細(xì)胞之間界線清晰,最利于區(qū)別和分揀受精與未受精的胚胎。之后胚胎細(xì)胞在繼續(xù)分裂的同時進(jìn)行急速的細(xì)胞遷徙(cell migration),向植物極擴(kuò)展,外包運(yùn)動(epiboly)開始。
原腸胚期(gastrula period)
5.25hpf胚胎進(jìn)入原腸胚期,細(xì)胞內(nèi)卷(involution)開始。當(dāng)胚胎發(fā)育進(jìn)入原腸胚期,器官-組織的命運(yùn)就基本確定下來。5.7hpf,胚環(huán)(germ ring)從動物極清晰可見,外包運(yùn)動短暫停頓;6hpf,胚盾開始形成,從動物極可見, 背腹軸(dorsal-ventral axis)確立;胚盾形成后,外包運(yùn)動繼續(xù),上胚層(epiblast)及下胚層(hypoblast)分開,胚盾持續(xù)向動物極延伸;10hpf外包運(yùn)動完成,尾芽(tail bud)萌出。
體節(jié)期(segmentation period)
10.3hpf第一對體節(jié)(somite)萌出,胚胎進(jìn)入體節(jié)期。之后伴隨胚體的增長,約每半小時增加一對體節(jié)[14],在18hpf達(dá)到18體節(jié)期。在12hpf左右,胚胎進(jìn)入6體節(jié)(6-somite)階段,眼原基(eye primordium)和KV(Kupffer’s vesicle)明顯可見。在此階段,胚胎發(fā)育出脊椎動物的基本身體結(jié)構(gòu)(body plan),神經(jīng)系統(tǒng)開始發(fā)育。在10體節(jié)階段,耳基板(otic placode)開始出現(xiàn)。在14體節(jié)階段,主要器官開始發(fā)育,循環(huán)系統(tǒng)、大腦神經(jīng)節(jié)管(brain neuromeres)和前腎管(pronephric duct)出現(xiàn)。隨著新的體節(jié)不斷萌出,之前發(fā)育的體節(jié)逐漸發(fā)育為肌節(jié)(myomere)。在20體節(jié)階段,晶狀體(lens)、耳泡(otic vesicle)陸續(xù)可見,后腦神經(jīng)管(hindbrain neuromeres)結(jié)構(gòu)開始突出。25至26體節(jié)階段,端腦(telencephalon)在神經(jīng)軸(neuraxis)前段明顯突出,內(nèi)耳石(otoliths)明顯可見。此后,體節(jié)會繼續(xù)增長但形成速度放緩,最終大致生成30-34個體節(jié),早期血島(blood island)分化出現(xiàn),中后腦分界(midbrain-hindbrain boundary) 明顯可見。體節(jié)形成后不久,近軸的細(xì)胞進(jìn)行顯著的形態(tài)學(xué)改變和遷移;他們開始一張大約20立方細(xì)胞所有相鄰脊索和結(jié)束的單層肌肉纖維表面的體節(jié),體節(jié)形成的時間,快速肌肉前體細(xì)胞表達(dá)豐富的myoD水平和myogenin開始[9, 15]。
24hpf胚胎進(jìn)入咽胚期,至48h結(jié)束,這一時期是重要的組織器官完成分化的時期,也是傳統(tǒng)認(rèn)為的最合適比較不同種類脊椎動物胚胎形態(tài)發(fā)生的時期。在此時期內(nèi),頭和軀干的夾角是一個重要的觀察指標(biāo);在此階段開始時,頭軀夾角小于90度,此后頭部逐漸伸直,在48hpf左右,夾角將大于120度。在此階段早期,心臟還是管狀結(jié)構(gòu)但已開始搏動;稍后血液循環(huán)開始運(yùn)行;此階段晚期心房心室開始生成。色素生成(pigment formation)于此階段早期,開始于視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞,隨后是背部皮膚之后逐漸向腹部和尾部延伸。同時大腦結(jié)構(gòu)出現(xiàn)明顯的腦室分區(qū);孵化腺(hatching gland)和側(cè)線(lateral line)開始顯現(xiàn)。
孵化期(hatching period)
48至72hpf被稱為孵化期,此階段胚胎的組織器官發(fā)育十分迅速,形成幼魚,逐漸破出卵膜,進(jìn)入水中,但是破膜孵化并不能作為此階段的指標(biāo)。此階段,咽區(qū)發(fā)生顯著變化:首先是兩眼之間見到很小的開口,隨后將逐漸發(fā)育為口(month);咽弓(pharyngeal arches)發(fā)育明顯,前端的咽弓逐漸發(fā)育為下頜(jaws)和鰓蓋(operculum),而后端的咽弓將發(fā)育為鰓(gills)。背部的黑色素條紋顯著,沿中線從頭部一直延伸到尾部。心包腔變得明顯,心臟結(jié)構(gòu)完整、跳動有力。4天左右,魚鰾(swim bladder)開始充氣,幼魚開始具備自由游動能力。
此后,早期器官發(fā)育繼續(xù)進(jìn)行,在5dpf左右,除生殖系統(tǒng)外,大部分組織器官的早期發(fā)育基本完成,幼魚開始自由游泳。在此階段,可以觀察到幼魚的眼睛追隨移動目標(biāo)、自主攝食及應(yīng)激躲避等行為,并開始表現(xiàn)出周期性的晝夜節(jié)律。在恒定的溫度環(huán)境(25-30℃)、正常的飼養(yǎng)密度和充分的食物供給情況下,斑馬魚3個月左右達(dá)到性成熟,可以交配產(chǎn)生下一代。